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常见ELISA试剂盒试验技能要点 远慕新闻√

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发布时间:2019/12/30 10:13:49

1.准备好所有试验额定所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等;
 

2.依据检测标本数量确认所需试剂的量;

 

3.按阐明书将所用试剂平衡至室温,制造所需试剂;

 

4.标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备,尽量分装做备份。短期内无法试验者,留意低温保存。


试验中为了确认信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预试验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的规范品的系列稀释。按试剂阐明书惯例供给的范围进行操作。

规范品的制造:对于每种细胞因子应仔细阅读阐明书,留意每批的细节。在运用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地回收其间的细胞因子。依据每批阐明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。

为了优化灵敏度,主张过夜孵育规范品和标本。若运用过氧化物酶作为显色体系,应禁止在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时,如血清,主张在标本稀释液中加不相干的Ig。


常见问题以及解决方法:
1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;
2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理;
3、洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;
4、显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况;
5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;
6、读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净;
7、严格按照说明书操作。

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