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远慕分享:伤口愈合/细胞划痕实验新方法分享

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发布时间:2019/12/12 10:03:14

细胞划痕实验是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移的体外试验方法。

这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。
 
优点:
1,在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。
2, 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。
3,与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用。

4,研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

传统实验方法

实验步骤:
1,培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。
2,细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。
3,,细胞铺满板底后,用1ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法的缺陷。)
4,吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。
5,加入无血清培养基,拍照记录。
6,将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。

7,根据收集图片数据分析实验结果。

Culture Insert方法
1,准备细胞,培养液,culture Insert。
2,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500μm宽度的划痕。
3,每隔4-6小时拍照记录。

4,根据收集图片数据分析实验结果。

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